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                          技術支持

                          小鼠糖化血清蛋白(GSP)ELISA試劑盒操作步驟
                          發布時間:2023-07-07   點擊次數:48次

                            小鼠糖化血清蛋白(GSP)ELISA試劑盒操作步驟


                            本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿,細胞上清及相關液體樣本中小鼠糖化血清蛋白(GSP)的含量。

                            實驗原理:

                            本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠糖化血清蛋白(GSP)水平。用純化的小鼠糖化血清蛋白(GSP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入糖化血清蛋白(GSP),再與HRP標記的糖化血清蛋白(GSP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖化血清蛋白(GSP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠糖化血清蛋白(GSP)濃度。

                            試劑盒組成:

                            試劑盒組成48孔配置96孔配置保存

                            說明書1份1份

                            封板膜2片(48)2片(96)

                            密封袋1個1個

                            酶標包被板1×481×962-8℃保存

                            標準品:720ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存

                            標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存

                            酶標試劑3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

                            樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

                            顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

                            顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存

                            終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

                            濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

                            樣本處理及要求:

                            1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

                            2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

                            3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

                            4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

                            5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

                            6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

                            7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

                            操作步驟:

                            標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為480 ng/L,320ng/L ,160 ng/L,80ng/L,40ng/L)。

                            加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

                            溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

                            配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

                            洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

                            加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

                            溫育:操作同3。

                            洗滌:操作同5。

                            顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

                            終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

                            測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

                            注意事項:

                            試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

                            濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

                            各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

                            請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

                            封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                            底物請避光保存。

                            嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

                            所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

                            本試劑不同批號組分不得混用。

                            10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

                            計算:

                            以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,

                            在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD

                            值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋

                            倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標

                            準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值

                            代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋

                            倍數,即為樣品的實際濃度。

                            試劑盒性能:

                            1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990以上。

                            2.批內與批見應分別小于9%和11%

                            檢測范圍:

                            20ng/L -700ng/L

                            保存條件及有效期:

                            1.試劑盒保存:;2-8℃。

                            2.有效期:6個月

                            ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。

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